化妝品體外安全性評價目前主要有針對皮膚刺激性評價、眼刺激性/腐蝕性評價、致敏性評價、光毒性評價。下文分別從上述四個方面介紹相應(yīng)的評價方法。
中科檢測可開展化妝品安全性評價，進行皮膚刺激性評價、眼刺激性/腐蝕性評價、皮膚致敏性評價、皮膚光毒性評價等體外安全性評價，出具的化妝品安全性評價告具有CMA資質(zhì)。
一、皮膚刺激性評價
皮膚刺激性是指皮膚接觸受試物后產(chǎn)生的局部可逆性損傷。目前體外替代試驗主要有重組人表皮模型試驗。
人表皮模型主要是將由人體取得的角質(zhì)形成細胞在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)，完全分化至具有多層皮膚結(jié)構(gòu)的三維人體表皮模型。將受試物涂抹于皮膚模型，暴露一定時間后用MTT法測試細胞存活率，若細胞存活率大于50%，則該物質(zhì)對皮膚無刺激；若細胞存活率小于等于50%，則該物質(zhì)有皮膚刺激性，但無法對刺激性進一步分類。
二、眼刺激性/腐蝕性評價
在某些情況下，眼睛可能成為化妝品及其成分作用的靶器官或吸收途徑，從而引起眼刺激/腐蝕，故眼刺激/腐蝕性的評價是化妝品及其成分安全性評價的必要內(nèi)容。至今，已有多種動物替代試驗的體外方法被開發(fā)和應(yīng)用。接下來主要對以下三種方法進行介紹。
1、兔眼角膜上皮細胞短時暴露試驗（STE）
2019年3月，國家藥品監(jiān)督管理局將化妝品用化學(xué)原料體外兔角膜上皮細胞短時暴露試驗方法納入《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）。
該方法的原理主要是，化合物直接作用于角膜引起的刺激作用類似于細胞毒性損傷作用，通過檢測細胞毒性指標(biāo)，可反映角膜損傷的程度。試驗采用體外培養(yǎng)的兔角膜上皮細胞（SIRC），短時暴露于化妝品用化學(xué)原料，模擬急性角膜刺激作用，通過計算細胞相對存活率來預(yù)測化妝品用化學(xué)原料引起的眼睛損傷。
2、重組人角膜（3D角膜）上皮模型試驗
3D角膜上皮模型是一種模擬角膜上皮和結(jié)膜損傷的分層上皮組織，可用檢測中度到極輕度范圍內(nèi)的眼刺激物。用于構(gòu)建角膜模型的上皮細胞來源于新生兒包皮角質(zhì)細胞的原代培養(yǎng)物，與角膜上皮非常相似。本方法利用體外重組3D角膜模型測試化學(xué)物質(zhì)改變組織活力的能力，從而預(yù)測化學(xué)物質(zhì)的潛在眼刺激性。
3、雞胚絨毛尿囊膜抗刺激試驗（HET-CAM）
受精雞胚的絨毛尿囊膜被認為是模擬物質(zhì)對眼結(jié)膜組織作用的合適模型，由于絨毛尿囊膜血管與人眼結(jié)膜血管組成較為相似，而人體粘膜，如眼結(jié)膜、嘴唇、鼻腔等，對外界刺激的敏感度遠遠大于皮膚的敏感度，尤其是人眼結(jié)膜的敏感度最高，所以目前雞胚絨毛尿囊膜被普遍使用。
三、皮膚致敏性評價
過敏性接觸性皮炎是皮膚重復(fù)接觸某種物質(zhì)后機體產(chǎn)生的免疫介導(dǎo)的皮膚反應(yīng)。人體的反應(yīng)通常表現(xiàn)為紅斑、瘙癢、丘疹等。皮膚致敏篩查是化妝品安全評價的重要內(nèi)容。
1、DPRA試驗
DPRA試驗是針對皮膚致敏有害結(jié)局通路中的分子起始時間開發(fā)的一種體外化學(xué)分析方法。DPRA試驗通過受試物與特征多肽共同孵育，采用HPLC分析反應(yīng)液中多肽的損耗，以評估受試物的肽反應(yīng)性。通過方法建立的預(yù)測模型，評估化學(xué)物質(zhì)是否可能是皮膚致敏原。
2、KeratinoSens TM試驗
KeratinoSens TM是一個基于轉(zhuǎn)染了選擇性質(zhì)粒的人角質(zhì)形成細胞（HaCaT）作為檢測系統(tǒng)的方法。通過定量檢測由Keap1-Nrf2-ARE反應(yīng)通路激活引起的熒光素酶基因表達情況，作為皮膚致敏的反應(yīng)量化指標(biāo)。
3、h-CLAT試驗
皮膚致敏試驗h-CLAT，利用與LC功能類似的細胞—人急性單核細胞（THP-1細胞）建立檢測方法，通過細胞表面特征標(biāo)志物CD54和CD86的改變來對物質(zhì)潛在的致敏性進行預(yù)測。
4、U-SENS試驗
U-SENS試驗使用人體骨髓細胞系U937細胞，與測試物接觸45h后定量檢測細胞表面標(biāo)志物CD86表達的變化。計算測試物與溶劑或空白對照相比CD86的相對熒光強度，通過預(yù)測模型預(yù)測致敏物與非致敏物。
四、皮膚光毒性評價
皮膚光毒性是指皮膚一次接觸化學(xué)物質(zhì)后，繼而暴露于長波紫外線照射下所引發(fā)的一種皮膚毒性反應(yīng)。2016年11月，原國家食品藥品監(jiān)督管理總局將化妝品用化學(xué)原料體外3T3中性紅攝取光毒性試驗方法納入《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）。
本試驗方法通過測定3T3成纖維細胞經(jīng)化學(xué)物質(zhì)和紫外線照射聯(lián)合作用后細胞吸收中性紅的能力或細胞毒性的變化來判斷該化學(xué)物質(zhì)是否具有光毒性。該方法已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)化妝品、化學(xué)品等實驗室評價光毒性的標(biāo)準方法之一，用于化學(xué)品監(jiān)管、化妝品原料測試和科學(xué)研究。
